Correction d’un gène dominant induisant une rétinite pigmentaire à l'aide de CRISPR/Cas9
Dans l’exemple présenté, un virus adéno-associé recombinant infectant spécifiquement les photorécepteurs est injecté au sein de la rétine. Ce virus contient une séquence codant deux éléments majeurs : la séquence codant la nucléase Cas9 (vert foncé) et la séquence d’un ARN guide (vert clair) spécialement conçu pour reconnaître la cible sur l’ADN à modifier (gène muté représenté en rouge). L’expression de ces séquences dans la cellule cible permet la correction du gène d’intérêt.
La perte de la vision de nuit, puis de la vision de jour, sont provoquées par une dégénérescence en premier lieu des bâtonnets (en bleu), suivi d’une dégénérescence des cônes (en jaune). Ces derniers dégénèrent de la périphérie vers le centre. Il a en effet été découvert que les bâtonnets produisaie...
Après recrutement de la Cas9 fusion à la séquence cible, l’enzyme (ici, la cytosine désaminase) modifie chimiquement une base, conduisant à la modification voulue. Réalisé à l'aide de Biorender.
L’œil humain est délimité par deux tissus : la cornée, transparente et recouvrant une majorité de la zone visible de l’œil, et la sclère (ou sclérotique), blanche et résistante aux chocs, située sur le reste du globe oculaire. La lumière entre dans l’œil par la cornée, traverse un premier gel transp...
RT : transcriptase inverse (reverse transcriptase). PBS : site de liaison à l’amorce (primer binding site).
Étape 1 : Grâce à sa séquence cible, l’ARNpeg s’hybride à la séquence d’intérêt sur la molécule d’ADN ciblée. La nCas9 réalise alors une coupe simple brin.
Étape 2 : Le site de liaison à l’amo...
Détail du complexe Cas9/ARNg fixé sur sa séquence cible d’ADN. Après coupure double brin trois nucléotides en amont du motif PAM, deux mécanismes sont possibles. La réparation non homologue (NHEJ pour Non Homologous End Joining) induit des mutations aléatoires de type insertion ou délétion (indels)....
