Détail du complexe Cas9/ARNg fixé sur sa séquence cible d’ADN. Après coupure double brin trois nucléotides en amont du motif PAM, deux mécanismes sont possibles. La réparation non homologue (NHEJ pour Non Homologous End Joining) induit des mutations aléatoires de type insertion ou délétion (indels). Si l’expérimentateur introduit une séquence avec des bras d’homologie, elle sera utilisée pour réparer la cassure et sera intégrée dans le génome par recombinaison homologue. Réalisé à l’aide de Biorender.
Principe de fonctionnement du système CRISPR/Cas9
Principe de fonctionnement du système CRISPR/Cas9
Autres médias
En génétique directe (A), on part sans à priori et l’on déduit le gène impliqué dans une fonction grâce au phénotype observé sur un mutant d’intérêt. En génétique inverse (B), on sélectionne préalablement un candidat à l’aide de données préliminaires, que l’on mute spécifiquement pour observer ensui...
Dans le cas de la drépanocytose, l’édition génomique est faite in vitro après prélèvement des cellules souches hématopoïétiques (précurseurs des globules rouges) du patient. Réalisé à l’aide de Biorender.
Détail du complexe Cas9/ARNg fixé sur sa séquence cible d’ADN. Après coupure double brin trois nucléotides en amont du motif PAM, deux mécanismes sont possibles. La réparation non homologue (NHEJ pour Non Homologous End Joining) induit des mutations aléatoires de type insertion ou délétion (indels)....
RT : transcriptase inverse (reverse transcriptase). PBS : site de liaison à l’amorce (primer binding site). Étape 1 : Grâce à sa séquence cible, l’ARNpeg s’hybride à la séquence d’intérêt sur la molécule d’ADN ciblée. La nCas9 réalise alors une coupe simple brin. Étape 2 : Le site de liaison à l’amo...