Les mêmes échantillons ont été soumis à séparation électrophorétique sur gel de polyacrylamide (7,5 %)-bisacrylamide (0,2 %), après dénaturation par du SDS, en présence (A, B, C) ou en absence (D, E) de β-mercaptoéthanol. Le gel est coloré au bleu de Coomassie. On constate que les masses moléculaires apparentes observées sont plus élevées en absence (170 ou 180 kDa) qu’en présence de β-mercaptoéthanol (bande diffuse à 75-80 ou 80kDa). On peut en déduire que la molécule isolée est composée de deux polypeptides reliés par un ou plusieurs pont(s) disulfure(s) interchaînes. Signalons que la protéine native est composée de deux unités de 170/180 kDa qui sont dissociées par le SDS. Une électrophorèse en conditions non dénaturantes aurait donc donné une bande au-delà des 300 kDa
Colonne A : marqueurs de masse moléculaire ; colonnes B et E : DBH (dopamine-β-hydroxylase) purifiées à partir de phéochromocytomes de rat ; C et D : DBH purifiées à partir de phéochromocytomes humains.
Analyse électrophorétique d’une molécule purifiée en présence ou en absence de β-mercaptoéthanol
image